El medio de cultivo:
Abono mineral 20-20-20 (sin urea) 1 gr
Agar 8 gr
Agua 1 Litro
Azúcar comercial 10 gr
Extracto de levadura 1 gr
Complejo de vitamina B1 ampolla, vial
Otros aditivos (leche de coco, plátano, etc)
Cámara de esterilidad
En cultivo in Vitro hablamos de esterilidad cuando no hay bacterias ni otros microorganismos: sólo está vivo el material vegetal que queremos hacer crecer.
Se hace una caja de metacrilato de unos 40 cm de altura por 60 de ancho y 40 de profundidad, sin fondo, que será la superficie de la mesa.
En la parte frontal se hacen unos orificios adecuados para introducir las manos a los que se les acoplan unos guantes largos. Por este sistema podremos trabajar sin tocar los materiales que estarán estériles.
Esterilización de materiales y medios de cultivo
- Olla a presión grande, o Autoclave
- Papel de aluminio.
- Tarros para microonda
Se vierte en los frascos de mermelada, echando unos 3 cm de altura.
Esterilización de Semillas y cápsulas:
Tres recipientes con agua esterilizada
Pinzas metálicas
Bisturí
Si se usan cápsulas verdes, éstas interiormente están estériles (microbiológicamente), por lo que se manejan simplemente con las pinzas y los lavados. Se esterilizan por fuera y después de los lavados se abren (longitudinalmente) con el bisturí y se siembran las semillas inmaduras que hay en el interior.
Esterilización de la cámara de esterilidad:
La cámara de esterilidad la podemos esterilizar de dos maneras:
- Con la aplicación de alcohol de 70%, proceso.
Introducimos en la cámara todos los materiales (ya estériles) con los que tengamos que trabajar que han salido de la olla y están cubiertos por papel de aluminio, pues una vez esterilizada la cámara no se puede abrir, y si hay que hacerlo, la esterilización ha de repetirse de nuevo. Se nebuliza cuidadosamente con alcohol con la ayuda de un pulverizador toda la cámara, de manera que matemos todos los microorganismos que están continuamente flotando en el aire. Para evitar que los materiales se nos empapen de alcohol se cubren con papel de aluminio. Además es conveniente tener dentro papel de cocina para recoger todo el alcohol que se va depositando sobre la mesa. Antes de empezar a trabajar se debe esperar 5 minutos a que se deposite todo el alcohol nebulizado.
Sembrado y Germinación:
En general, la germinación es mejor en oscuridad, así que después mejor guardar los frascos en una caja bien cerrada y observarlas semanalmente.
Después de unos 15 días a un mes (a veces más) se empiezan a ver las semillas engrosar y más adelante formar la yema apical y la primera raíz.
